El Lector ELISA (Ensayo inmunoabsorbente Ligado a Enzimas) es un dispositivo esencial que se utiliza en los laboratorios de diagnóstico y de investigación. El propósito de este blog es ofrecer una visión general de la función, los principios de operación y las condiciones de trabajo del Lector ELISA. También se tratarán temas sobre la calibración, las rutinas de mantenimiento y la solución de problemas.
Propósito del Analizador
El Lector ELISA es una herramienta indispensable para realizar ensayos de ELISA, que se utilizan para detectar y cuantificar sustancias como péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas. Este instrumental permite a los investigadores y técnicos de laboratorio analizar una variedad de muestras biológicas con alta sensibilidad y especificidad.
Principios de Operación
El analizador de ELISA a diferencia de los espectrofotómetros convencionales que permiten efectuar lecturas en un rango amplio de longitudes de onda, este dispone de filtros o rejillas de difracción que limitan el rango de longitudes de onda a aquellas que se utilizan en la técnica ELISA, la cual generalmente se realiza con longitudes de onda comprendidas entre los 400 y los 750 nm. Algunos analizadores operan en el rango ultravioleta y pueden efectuar análisis entre los 340 y los 700 nm. El sistema óptico utilizado por muchos fabricantes utiliza la fibra óptica para levar la luz hasta los pozos de la placa, donde se encuentra la muestra bajo análisis. La luz que atraviesa la muestra tiene un diámetro que varía entre 1 y 3 mm. Un sistema de detección recibe la energía lumínica, proveniente de la muestra, la amplifica, determina la absorbancia y, a través de un sistema de lectura, la convierte en datos que permiten interpretar el resultado de la prueba. También hay analizadores de ELISA que emplean sistemas lumínicos de doble haz. Las muestras del ensayo de ELISA se colocan en placas de diseño especial, las cuales disponen de un número definido de pozos o vasos, en los cuales se lleva a cabo el procedimiento o ensayo. Son comunes las placas de 8 columnas por 12 filas, con un total de 96 pozos. También existen placas con un mayor número de pozos. Las hay de 384 pozos y la tendencia actual busca aumentar el número de pozos, y reducir la cantidad de reactivos y el volumen de las muestras requeridas. La ubicación de los sensores ópticos en el analizador de ELISA varía dependiendo de los fabricantes. Algunos los colocan sobre la placa portamuestras, mientras que otros los ponen directamente bajo los pozos de la placa.
Condiciones de Trabajo
Las condiciones de trabajo para un lector ELISA pueden variar dependiendo del modelo y del fabricante. Sin embargo, es imperativo mantener:
- Un ambiente limpio, libre de polvo.
- Una mesa de trabajo estable. Lo recomendable es que la misma esté alejada de equipos que generen vibraciones centrífugas, agitadores, que tenga un tamaño adecuado que permita ubicar, al lado del analizador de ELISA, los equipos complementarios requeridos para efectuar la técnica en mención: lavadores, incubadora, dispensador y computador con periféricos.
- Una fuente de suministro eléctrico de acuerdo con las normas y estándares implementados en el país. En los países americanos se utilizan por lo general voltajes de 110 V y frecuencias de 60 Hz.
Calibración
La calibración de un analizador de ELISA es un proceso especializado que debe realizar un técnico o ingeniero debidamente entrenado, siguiendo las instrucciones que para el efecto brinda cada fabricante. Para efectuar la calibración se requiere disponer de un juego de filtros, los cuales se encuentran montados en una placa de igual geometría a las utilizadas para efectuar los análisis. Los fabricantes suministran dichos filtros y pueden ser utilizados para realizar calibraciones a cualquier longitud de onda de las que utiliza el equipo.
Rutinas de Mantenimiento Preventivo
- Realizar desarme del equipo, realizar una inspección visual sobre el estado del equipo internamente.
- Utilizar una brocha limpia para retirar el polvo de la tarjeta electrónica y del ventilador de enfriamiento del sistema.
- Revisar que los sensores ópticos de cada canal estén limpios. Si se detecta suciedad, limpiar con una pera la superficie de las ventanas de los emisores de luz y de los sensores.
- Confirmar que el sistema de iluminación esté limpio, de lo contrario utilizar una pera o aire comprimido la superficie de la lampara.
- Examinar el avance automático de la placa, el mismo debe ser suave y constante de lo contrario, limpiar el mecanismo de avance de la placa.
- Verificar la alineación de cada pozo con los sistemas emisores y detectores de luz.
Solución de Problemas
| Problema | Causa Probable | Solución |
|---|---|---|
| El analizador brinda lecturas sin sentido | Lampara de iluminación fuera de servicio. | Remplazar lampara por una de las mismas características. |
| Lectura del analizador varia de fila en fila. | Sensores ópticos sucios. | Limpiar los sensores. |
| Lentes o elementos del sistema de iluminación sucios | Limpiar lentes del sistema de iluminación. | |
| Falta de calibración de uno o más canales. | Vaciar la calibración de cada uno de los canales. | |
| Problema con los blancos. | Efectuar una lectura en vacío y compararla contra la lectura del blanco. Si el sistema lee bien, deberá encontrarse una lectura de densidad óptica similar. Caso contrario, el analizador esta descalibrado. | |
| El analizador presenta absorbancias altas. | Reactivos usados y/o preparados de forma incorrecta | Revisar que el TMB sea Incoloro y la preparación adecuada |
| Contaminación de otras muestras. | Repetir el ensayo verificando la marcación, el lavado y la forma de usar la pipeta | |
| Filtro de longitud de onda incorrecto | Verificar la longitud de onda recomendada para el ensayo, ajustar si es el caso. | |
| Lavado insuficiente o ineficiente. | Confirmar el método de lavado utilizado. | |
| Tiempo de incubación muy largo ó temperatura muy alta. | Revisar tiempos y temperatura de incubación. | |
| Dilución de muestras mal procesada. | Revisar proceso de dilución de muestras. | |
| El analizador presenta absorbancias bajas. | Los reactivos no se encuentran a la temperatura ambiente. | Comprobar que los reactivos estabilicen su temperatura con los del ambiente. |
| Lavado excesivo de la placa. | Ajustar el proceso de lavado a lo indicado por el fabricante del ensayo | |
| Filtro de longitud de onda incorrecto. | Verificar la longitud de onda recomendada para el ensayo, ajustar si es el caso. | |
| La placa presenta rajaduras en el fondo de los pozos | La placa presenta rajaduras en el fondo de los pozos | |
| Tiempo de incubación muy corto ó temperatura muy baja. | Revisar tiempos y temperatura de incubación. | |
| Reactivos usados o preparados de forma incorrecta. | Revisar los reactivos utilizados. Comprobar las diluciones |
Conclusión
El Lector ELISA es una herramienta valiosa en el laboratorio, pero su eficacia depende en gran medida de su correcto manejo y mantenimiento. Comprender su propósito, principios de operación y condiciones de trabajo, así como la importancia de la calibración y el mantenimiento, puede contribuir a su funcionamiento eficaz y a la precisión de los resultados de los ensayos.
